摘要

近年來(lái)國(guó)家出臺(tái)系列相關(guān)政策支持傳統(tǒng)中醫(yī)的創(chuàng)新和發(fā)展，將中醫(yī)藥發(fā)展列入國(guó)家發(fā)展戰(zhàn)略，中醫(yī)藥將對(duì)社會(huì)發(fā)展做出更大貢獻(xiàn)。在2016年印發(fā)的《中醫(yī)藥發(fā)展戰(zhàn)略規(guī)劃綱要（2016—2030年）》中提出，到2020年，實(shí)現(xiàn)人人基本享有中醫(yī)藥服務(wù)，中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)成為國(guó)民經(jīng)濟(jì)重要支柱之一；到2030年，中醫(yī)藥服務(wù)領(lǐng)域?qū)崿F(xiàn)全覆蓋，中醫(yī)藥健康服務(wù)能力顯著增強(qiáng)，對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展作出更大貢獻(xiàn)，傳統(tǒng)中醫(yī)的創(chuàng)新發(fā)展將迎來(lái)高光時(shí)刻。而作為中醫(yī)藥中重要的組成部分——中藥也成為了人們關(guān)注的焦點(diǎn)，中藥中農(nóng)藥的殘留量的檢測(cè)和限定也成為了中藥使用過(guò)程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。作為我們?nèi)粘３Ｒ?jiàn)及廣泛使用的中藥中的一類(lèi)，枸杞子中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)也成為使用和食用枸杞子的一個(gè)必要環(huán)節(jié)。

近年來(lái)，隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)農(nóng)藥殘留相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的日益完善、監(jiān)管力度的不斷加強(qiáng)、責(zé)任主體安全意識(shí)的持續(xù)提高，農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)得到快速發(fā)展，萊伯泰科可以提供智能化、一體化的農(nóng)殘前處理解決方案。

本文參考《GB 23200.11-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中413種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜法》提供枸杞子中部分農(nóng)藥殘留的測(cè)定方案。

1、儀器設(shè)備及試劑耗材

1.1儀器設(shè)備

SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，萊伯泰科

MVP全自動(dòng)高通量真空平行濃縮儀，萊伯泰科

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)  AB4500

全自動(dòng)均質(zhì)儀MH-400，萊伯泰科

MiniLab 3000全自動(dòng)液體處理平臺(tái)，萊伯泰科

M64高通量平行濃縮儀，萊伯泰科

1.2標(biāo)準(zhǔn)品

19種農(nóng)藥混標(biāo)農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100μg/mL

19種農(nóng)藥混標(biāo)農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)工作液：取100μL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL的容量瓶中，用乙腈定容，得到濃度為1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程

2.1提取

稱(chēng)取樣品枸杞子1.0g（精確至0.01g），置于50mL離心管中，加入5mL水，15mL乙腈，15000r/min均質(zhì)提取1min，加入2g氯化鈉，再均質(zhì)提取1min，取上清液于40mL帶尾管濃縮杯中，在離心管中加入15mL乙腈，重復(fù)均質(zhì)提取1min，8000r/min離心5min,取全部上清液與之前的上清液合并。于溫度40℃，轉(zhuǎn)數(shù)200r/min，梯度壓力500mbar/1min-300mbar/2min-220mbar/5min-200mbar/5min-180mbar/15min條件下減壓真空濃縮至1~2mL，用4mL乙腈-甲苯（3+1）沖洗濃縮杯壁，并重復(fù)1次，待凈化。

加標(biāo)樣品，于稱(chēng)樣完成時(shí)加入1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液100μL，提取步驟同上。

2.2 SPE凈化

在TPH柱中加入2cm高無(wú)水硫酸鈉，按照?qǐng)D1所示進(jìn)行SPE1000方法編輯，加載并運(yùn)行方法，完成2.1中所有樣品的萃取凈化。

收集洗脫液于60mL收集瓶中，于溫度40℃、轉(zhuǎn)數(shù)180r/min、梯度壓力500mbr/1min-300mbar/2min-200mbar/3min-180mbar/10min-150mbar/10min-100mabr/30min條件下減壓真空濃縮近干，并于溫度40℃、壓力3psi條件下經(jīng)M64氮吹至干，加入1mL乙腈，混勻。0.22μm濾膜過(guò)濾，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

圖1  固相萃取方法

2.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

A）色譜柱：C18，柱長(zhǎng)100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑2.7μm

B）流動(dòng)相：0.1%甲酸水：乙腈，梯度見(jiàn)表1.

C）柱溫：40℃

D）進(jìn)樣量：10μL

E）離子源：ESI

F）掃描方式：正離子掃描

G）檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

H）離子噴霧電壓：5500

表一液相梯度表

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線配置

標(biāo)準(zhǔn)曲線使用MiniLab 3000 全自動(dòng)液體處理平臺(tái)配置，具體步驟見(jiàn)圖2。

圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線配置步驟

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線總離子色譜圖

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線色譜圖

3.2基質(zhì)空白離子色譜圖

圖4 基質(zhì)空白色譜圖

3.3加標(biāo)樣品離子色譜圖

圖5 加標(biāo)樣品色譜圖

3.4各目標(biāo)物曲線線性

圖6 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

3.5 加標(biāo)回收結(jié)果

表2 加標(biāo)回收率結(jié)果

4.結(jié)果與討論

本方法使用SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)對(duì)枸杞子中甲拌磷、毒死蜱、克百威等19種農(nóng)藥進(jìn)行萃取，經(jīng)MVP減壓濃縮后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜/質(zhì)譜器進(jìn)行檢測(cè)，加標(biāo)回收率范圍在65.0%-104.7%，RSD為2.21%-9.54%，方法的加標(biāo)回收率滿足要求，適合枸杞子中甲拌磷、毒死蜱、克百威等農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

此次實(shí)驗(yàn)使用了MH-400、MVP、SPE1000、M64及MiniLab3000整體解決方案，全過(guò)程高度自動(dòng)化、批量化，減少實(shí)驗(yàn)中提取試劑的轉(zhuǎn)移，提高實(shí)驗(yàn)效率、節(jié)省了實(shí)驗(yàn)人員的時(shí)間，儀器封閉及主動(dòng)排廢的功能減少了實(shí)驗(yàn)室和環(huán)境的污染，保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員安全。

參考標(biāo)準(zhǔn)

GB 23200.11-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中413種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜法